质粒构建
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DNA 克隆

通过各种DNA克隆方法,可以短时、高效、保质地完成服务。我们专业的分子生物学团队从设计到PCR克隆提供全方位的服务,
可以充分满足您的实验要求。

细菌的DNA克隆是把外源基因与克隆载体进行体外连接,继而转化宿主细胞,筛选出含有目的基因重组质粒的转化子,
并将该转化子大量扩增提取重组质粒的过程。

服务内容
1、PCR产物TA克隆:使用Ex Taq或LA Taq等聚合酶扩增的PCR产物3′ 末端带有一个“A”尾,
      可直接克隆至带有“T”末端的载体上 (如pMD19 -T Vector等)。
2、目的基因亚克隆:将含有目的基因的质粒采用酶切方法克隆至商品化的表达载体或改造后的特殊载体上。
3、以质粒为模板PCR扩增目的基因后克隆:将质粒上的一段序列通过PCR加入酶切位点或将几个不同来源
      的片段通过PCR拼接后进行克隆。
4、多片段高效克隆:使用Clontech公司独创的In-Fusion克隆技术,可以通过同源重组,无需加入连接酶,
      将PCR产物一次性克隆至所需载体(目前成功的案例中最多一次克隆6个片段)。同时该方法也适用于扩增片
      段内含有克隆所用限制性酶切位点,酶切方法无法克隆的情况。


载体构建
通过各种DNA克隆方法,可以短时、高效、保质地完成服务。我们专业的分子生物学团队从设计到克隆提供全方位的服务,
可以充分满足您的实验要求。

DNA克隆是把外源基因与克隆载体进行体外连接,继而转化宿主细胞,筛选出含有目的基因重组质粒的转化子,
并将该转化子大量扩增提取重组质粒的过程。

载体构建的基本步骤:
1、用限制性内切酶分别酶切消化表达载体或克隆载体,同时用相同的限制性内切酶酶切含有目的片段的载体;
2、琼脂糖凝胶电泳,检测酶切是否成功;
3、酶切成功,割胶回收目的片段;
4、用T4连接酶或其他相关的酶将载体骨架和目的片段连接;
5、连接产物转化宿主如大肠杆菌,毕赤酵母或其他相关宿主;
6、.阳性克隆子的筛选;

根据载体上抗性基因筛选连接正确的重组子,提取重组质粒,酶切,验证连接是否成功。

但最好的验证方法是将重组子送交测序公司测序。

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